疾病模型＆免疫缺陷鼠
ApoE小鼠
ApoE 基因敲除小鼠是通過同源重組技術(shù)制備的具有 3 號外顯子純合缺失的小鼠模型。2017 年斯貝福（北 京）生物技術(shù)有限公司從國家嚙齒類實驗動物種子中心引入培育。
特征
ApoE 小鼠模型表現(xiàn)出異常高血脂癥狀，在 3 月齡時即出現(xiàn)動脈脂肪堆積，17 月齡時小鼠腦內(nèi)將出現(xiàn)脂瘤性纖維瘤。
學習記憶能力出現(xiàn)障礙，其與 CHD、高脂血癥、腦梗塞、AD 及慢性乙型肝炎等疾病相關(guān)。
用途
用于研究 ApoE 基因相關(guān)疾病，如糖尿病與肥胖研究，心血管研究，動脈粥樣硬化研究以及新陳代謝研究。
成長曲線
生理生化數(shù)據(jù)
|
品系周齡 |
APOE (8 weeks) |
||
|
指標 |
單位 |
雄 |
雌 |
|
白細胞計數(shù) |
WBC (109/L) |
3.03±0.45 |
2.53±0.56 |
|
嗜中性粒細胞計數(shù) |
Neu (109/L) |
0.47±0.11 |
0.46±0.14 |
|
淋巴細胞計數(shù) |
Lym (109/L) |
2.46±0.36 |
1.99±0.45 |
|
單核細胞計數(shù) |
Mon (109/L) |
0.08±0.06 |
0.06±0.03 |
|
嗜酸性粒細胞計數(shù) |
Eos (109/L) |
0.02±0.01 |
0.02±0.01 |
|
嗜堿性粒細胞計數(shù) |
Bas (109/L) |
0±0 |
0±0 |
|
嗜中性粒細胞比例 |
Neu (%) |
15.12±2.28 |
18.12±3.37 |
|
淋巴細胞比例 |
Lym (%) |
81.18±3.59 |
78.44±3.55 |
|
單核細胞比例 |
Mon (%) |
2.66±1.99 |
2.18±0.96 |
|
嗜酸性粒細胞比例 |
Eos (%) |
0.86±0.25 |
1.14±0.43 |
|
嗜堿性粒細胞比例 |
Bas (%) |
0.18±0.13 |
0.12±0.07 |
|
紅細胞計數(shù) |
RBC (1012/L) |
7.53±0.32 |
8.03±0.39 |
|
血紅蛋白濃度 |
HGB (g/L) |
121.9±5.36 |
127±5.48 |
|
紅細胞壓積 |
HCT (%) |
37.11±1.75 |
39.51±1.91 |
|
平均紅細胞體積 |
MCV (fL) |
49.28±0.89 |
49.2±0.62 |
|
平均紅細胞血紅蛋白含量 |
MCH (pg) |
16.18±0.16 |
15.83±0.14 |
|
平均紅細胞血紅蛋白濃度 |
MCHC (g/L) |
328.8±3.82 |
321.9±3.08 |
|
紅細胞分布寬度變異系數(shù) |
RDW-CV (%) |
12.33±0.71 |
11.74±0.58 |
|
紅細胞分布寬度標準差 |
RDW-SD (fL) |
25.71±1.74 |
24.18±1.37 |
|
血小板計數(shù) |
PLT (109/L) |
623.9±124.87 |
922.5±138.75 |
|
平均血小板體積 |
MPV (fL) |
4.9±0.2 |
4.65±0.17 |
|
血小板體積分布寬度 |
PDW |
15.19±0.12 |
15.18±0.11 |
|
血小板壓積 |
PCT (%) |
0.3±0.06 |
0.43±0.05 |
|
品系周齡 |
APOE (8 weeks) |
|||
|
指標 |
單位 |
雄 |
雌 |
|
|
谷丙轉(zhuǎn)氨酶 |
ALT |
U/L |
25.97±4.16 |
33.53±5.96 |
|
谷草轉(zhuǎn)氨酶 |
AST |
U/L |
110.09±30.51 |
138.67±32.16 |
|
血清鈣 |
Ca |
mmol/L |
1.56±0.29 |
1.38±0.41 |
|
血清磷 |
P |
mmol/L |
11.83±1.18 |
8±0.54 |
|
血糖 |
Glu-G |
mmol/L |
3.34±0.47 |
3.16±0.69 |
|
堿性磷酸酶 |
ALP |
U/L |
219.99±31.41 |
276.42±39.34 |
|
γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶 |
γ-GT |
U/L |
-0.18±3.87 |
0.76±1.22 |
|
血清總蛋白 |
TP |
g/L |
51.4±1.97 |
49.12±3.43 |
|
α-淀粉酶 |
α-AMY |
U/L |
2966.21±362.29 |
2700.54±423.1 |
|
血清甘油三酯 |
TG |
mmol/L |
965.51±475.65 |
753.89±154.62 |
|
膽固醇 |
TC |
mmol/L |
525.54±151.66 |
491.61±46.91 |
|
肌酸激酶 |
CK |
U/L |
31.06±1.26 |
29.13±1.8 |
|
乳酸脫氫酶 |
LDH |
U/L |
31.7±6.4 |
23.16±2.77 |
|
血清白蛋白 |
ALB Ⅱ |
g/L |
11.63±1.66 |
8.88±0.93 |
|
脂肪酶 |
LIP |
U/L |
2.59±0.35 |
2.37±0.17 |
|
尿素氮 |
UREA |
mmol/L |
2.43±0.16 |
2.19±0.15 |
|
血清鎂 |
Mg Ⅱ |
mmol/L |
1.48±0.08 |
1.38±0.06 |
樣本信息和目的
-
樣本：ApoE小鼠
-
目的：確認ApoE小鼠基因修飾類型
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靶基因：ApoE apolipoprotein E（apoE）
-
NCBI號：11816
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/11816
方法和結(jié)果
ApoE（apolipoprotein E）是載脂蛋白 E，一種脂肪結(jié)合蛋白（載脂蛋白），乳糜微粒和中密度脂蛋白（IDLs）的一部分。ApoE 主要負責運輸脂蛋白、脂溶性維生素及膽固醇。ApoE 基因位于 Chr7 上，共有 7 個外顯子。
查詢目前所有 ApoE 敲除品系的設(shè)計方案和基因型鑒定方案，結(jié)果顯示目前的方案主要有兩種：胚胎干細胞技術(shù)和 CRISPR/Cas9 方案，針對兩種方案分別設(shè)計擴增和測序引物，具體方案如表1：
ApoE 純合子靶基因 PCR 擴增及瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖 2，結(jié)果顯示，該動物為 ES 干細胞法制作的 ApoE 突變小鼠。
注：1、2為方案1擴增結(jié)果，3、4為方案2擴增結(jié)果，5、6為方案3擴增結(jié)果。1、3、5泳道基因組模板為ApoE小鼠，2、4、6泳道為空白對照組，模板為水。
ApoE 突變小鼠是 Nobuyo Maeda 博士在 The University of North Carolina 開發(fā)的，他們使用胚胎干細胞技術(shù)產(chǎn)生 ApoE 基因突變的小鼠品系，質(zhì)粒載體設(shè)計方案如圖 3：
使用oIMR0180和oIMR0182 引物對靶基因進行擴增，并進行雙向 Sanger 測序。與 NCBI 報道的 ApoE 基因外顯子序（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_009696.4）比對，結(jié)果顯示：oIMR0180 引物正向測序比對失?。ńY(jié)果未顯示），oIMR0182 反向測序，ApoE 基因 3 號外顯子部分序列可以擬合。ApoE 基因外顯子序列上 289 號堿基開始3號外顯子剩余序列被Neo基因（新霉素抗性基因 ）所取代（如圖 4）。ApoE 基因其他外顯子擴增測序結(jié)果未顯示突變。
結(jié)論
斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司 ApoE 小鼠的基因編輯類型為：ApoE 基因3號外顯子部分堿基（125bp）和部分內(nèi)含子被 Neo 基因取代，其他外顯子無突變。
