疾病模型＆免疫缺陷鼠
db/db小鼠
db/db 小鼠為瘦素受體自發(fā)性突變小鼠，由 Bar Harbor 于 1966 年在 C57BLKS/J（BKS）近交系中發(fā)現(xiàn)。
特征
多食、消渴、多尿、極度肥胖。表型的嚴重程度受基因背景的影響。
表現(xiàn)出心肌病、周圍神經(jīng)病變、糖尿病視網(wǎng)膜病變、傷口愈合遲滯等糖尿病并發(fā)癥。
易肥胖，體重增長快，活動減少，血脂高，幼年時血糖和胰島素增長不明顯，后期血糖和胰島素水平上升。
相對于野生型小鼠，db/db 小鼠能夠增加胰島素的敏感性，脂肪細胞也有所增加。
用途
db/db 小鼠用于糖尿病與肥胖、代謝、傷口愈合、免疫與炎癥、內(nèi)分泌、生殖等方面的研究。T2D 型糖尿病模型，應用于糖尿病的藥物篩選、肥胖癥的生理生化指標及藥物治療等的研究。
dbdb小鼠血糖
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樣本信息和目的
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樣本：db/db小鼠
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目的：確認db/db小鼠基因修飾類型
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靶基因：Lepr leptin receptor
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Gene ID：16847
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/16847
方法和結(jié)果
LRPR（leptin receptor，瘦素受體，又名db ）蛋白屬于細胞因子受體 gp130 家族，該蛋白通過激活胞質(zhì) STAT蛋白來刺激基因轉(zhuǎn)錄。LRPR 是瘦素（調(diào)節(jié)體重的脂肪細胞特異性激素）的受體，并參與脂肪代謝的調(diào)節(jié)以及正常淋巴細胞生成所需要的新型造血途徑。該基因的突變與肥胖和垂體功能障礙有關(guān)。Lepr基因位于小鼠 4 號染色體上，有 21 個外顯子（圖1）。
文獻查詢顯示，db/db 小鼠 Lepr 基因中內(nèi)含子從 G 到 T 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)生了一個供體剪接位點，該剪接位點導致異常剪接，導致 Ob-Rb 剪接形式的長細胞結(jié)構(gòu)域過早終止，失去其信號轉(zhuǎn)導功能，我們以 db/db 小鼠、C57 小鼠（6-10）和灰色小鼠（m/m）的基因組為模板、使用文獻（Acta Pharmacologica Sinica (2018) 39: 117–123）中報道的引物：
FO-1：5′-TTGTTCCCTTGTTCTTATACCTATTCTGA-3′
RO-1：5′-CTGTAACAAAATAGGTTCTGACAGCAAC-3′
FI-1：5′- ATTAGAAGATGTTTACATTTTGATGGAAGG-3′
RI-1：5′- GTCATTCAAACCATAGTTTAGGTTTGTCTA-3′
純合子：610bp 和 406bp；野生型：610bp 和 264bp；雜合子：610bp、406bp 和 264bp 進行 Lepr 基因的擴增，結(jié)果顯示：db/db 純合子表現(xiàn)出 610bp 和 406bp 兩條帶，C57 小鼠（6-10）和灰色小鼠（m/m）表現(xiàn)出 610bp 和406bp 兩條帶，符合文獻報道。同時對 db/db 小鼠的 610bp 條帶進行測序，結(jié)果顯示在內(nèi)含子 18（轉(zhuǎn)錄本 201E18-E19 中）上有一個 G 到 T 的突變。此外，為了鑒定 db/db 小鼠 lepr 基因無其他突變，我們對 Lepr 基因的外顯子進行全測序。Lepr 基因有多個轉(zhuǎn)錄本信息（圖 2），為了檢測 db/db小鼠基因突變類型，我們使用轉(zhuǎn)錄本 201（外顯子有 19 個）設(shè)計各外顯子的 PCR擴增和測序引物（表 1），并對 db/db 小鼠的 DNA 模板進行 19 個外顯子進行 PCR 擴增和測序。
http://asia.ensembl.org/Mus_musculus/Tran/Exons?db=core;g=ENSMUSG00000057722; r=4:101717404-101815352;t=ENSMUST0000003755
結(jié)論
斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司db/db小鼠的基因編輯類型為：Lepr基因內(nèi)含子 18（轉(zhuǎn)錄本201 E18-E19中）上有一個 G 到 T 的突變。
